目的:探讨双链探针实时荧光 PCR 核酸检测新技术应用效果。方法：选择 2019 年 5 月-2021 年 4 月核酸检测标本 10 例为对象，采用双链探针与 TaqMan 探针同时测定不同浓度的检测标本；采用实时荧光 PCR 仪完成核酸 Ct 值检测，并对检测结果进行分析；采用双链探针检测代谢酶 CYP2C19*2不同基因型标本，借助实时荧光 PCR 仪完成核酸 Ct 值检测，确定基因型。结果：双链探针和 TaqMan 探针测定 Ct 值存在明显差异性（P<0.05），且双链探针均能有效检出，Ct 值大小优于 TaqMan 探针，说明双链探针灵敏度更高；仅探针野生链荧光信号强度随着循环次数的增加而增加；建立的多指标双链探针能实现基因点突变检测，其检测结果与 Sanger 测序一致，能区分、确定不同的基因型。结论：双链探针实时荧光 PCR 核酸检测能获得较高的灵敏度，可实现基因型分析，可为临床诊疗提供参考依据。